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雜交瘤技術(shù)是一種用于生產(chǎn)單克隆抗體的生物技術(shù)，由Georges Kohler和César Milstein于1975年發(fā)明，并因此獲得了1984年的諾貝爾獎(jiǎng)。該技術(shù)的基本原理是通過融合兩種細(xì)胞而同時(shí)保持兩者的主要特征：一種是經(jīng)抗原免疫的小鼠脾細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞），另一種是具有無(wú)限分裂能力的小鼠骨髓瘤細(xì)胞。

具體來(lái)說，B淋巴細(xì)胞在受到特定抗原刺激后，可以大量增殖并分泌針對(duì)該抗原的特異性抗體，但這些細(xì)胞在體外環(huán)境下存活時(shí)間較短；而骨髓瘤細(xì)胞則可以在培養(yǎng)條件下無(wú)限分裂和增殖，即具有所謂的永生性。通過將這兩種細(xì)胞進(jìn)行融合，可以形成一種新的細(xì)胞——雜交瘤細(xì)胞。這種細(xì)胞既保留了B細(xì)胞的抗體分泌功能，又具備了骨髓瘤細(xì)胞的永生性，能夠在選擇性培養(yǎng)基中持續(xù)生長(zhǎng)和繁殖。

雜交瘤技術(shù)的操作流程通常包括以下幾個(gè)步驟：

? 免疫小鼠：首先對(duì)小鼠進(jìn)行免疫接種，使其產(chǎn)生針對(duì)特定抗原的抗體。

? 分離脾細(xì)胞：從免疫后的小鼠體內(nèi)提取脾臟，并從中分離出B淋巴細(xì)胞。

? 融合細(xì)胞：將這些B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，通過使用聚乙二醇（PEG）作為融合劑，使兩者結(jié)合形成雜交瘤細(xì)胞。

? 篩選雜交瘤細(xì)胞：將融合后的細(xì)胞在含有次黃嘌呤、氨甲蝶呤和胸腺嘧啶（HAT）的選擇性培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，以淘汰未融合或非目標(biāo)細(xì)胞，保留能夠生長(zhǎng)且能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞。

? 二次篩選：進(jìn)一步通過有限稀釋法將雜交瘤細(xì)胞接種在多孔板上，每孔不超過一個(gè)細(xì)胞，通過培養(yǎng)讓其增值，然后檢測(cè)各孔上清液中抗體的特異性，最終確定陽(yáng)性克隆。

系統(tǒng)的腹水法已逐漸被體外大規(guī)模培養(yǎng)所取代，這包括懸浮培養(yǎng)、微載體懸浮培養(yǎng)、微囊培養(yǎng)以及中空纖維培養(yǎng)等方法。這些方法不僅提高了單克隆抗體的產(chǎn)量，還便于質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。

雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)的工藝流程一般分為以下幾個(gè)階段：

? 細(xì)胞選擇與融合：首先從免疫動(dòng)物中獲取B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，通過PEG誘導(dǎo)劑進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞。

? 篩選與克隆化：將融合后的細(xì)胞接種到含有HAT培養(yǎng)基的96孔板中進(jìn)行篩選，只有成功融合的雜交瘤細(xì)胞才能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。

? 工藝優(yōu)化：根據(jù)具體需求，對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，如調(diào)整培養(yǎng)基成分、改變攪拌速度等，以提高雜交瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)密度和抗體產(chǎn)量。

? 純化與收獲：最后通過收集培養(yǎng)上清液并離心去除細(xì)胞碎片，得到所需的單克隆抗體

1. 能夠生產(chǎn)大量均一的單克隆抗體，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定且親和力較好。

2. 可以永久傳代和大規(guī)模生產(chǎn)抗體。然而，該技術(shù)也存在一些局限性：周期較長(zhǎng)，需要經(jīng)過兩次篩選過程。

3. 存在遺傳異質(zhì)性問題，可能影響抗體的一致性和效能。

4. 需要合適的培養(yǎng)基和設(shè)備維護(hù)。

總之，雜交瘤技術(shù)不僅為單克隆抗體的生產(chǎn)提供了穩(wěn)定可靠的平臺(tái)，也為免疫學(xué)和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。