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1、1個96T試劑盒能測多少個樣？

2、標(biāo)準(zhǔn)品500ml（96T/48T），能夠測多少次？

1）單標(biāo)可以測四次

2）雙標(biāo)可以測兩次

3、血液樣本如何選擇測ELISA？

1、血漿全血標(biāo)本經(jīng)抗凝分離后去除血細(xì)胞成分即為血漿，主要化學(xué)成分測定和凝血項目檢測等。

2、血清是血液離休凝固后分離出來的液體，血清與血漿相比較，主要是缺乏纖維蛋白原，某些凝血因子也發(fā)生了變化。血清主要用于化學(xué)和免疫學(xué)等檢測。

說明書上一般寫血漿和血清都可以檢測，根據(jù)需要選擇，例如：纖維蛋白原檢測用血漿樣本，血清樣本檢測纖維蛋白原殘留。

來源：劉成玉. 臨床檢驗基礎(chǔ)[M]. 2005.P5

4、血液樣本發(fā)生溶血是否能檢測？

輕微溶血勉強(qiáng)可以檢測，明顯溶血建議重新取樣，溶血因紅細(xì)胞破壞溶解時釋放大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA，會導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測定結(jié)果。

來源：

http://www.360doc.com/content/18/1207/05/52645714_799883575.shtml

5、組織樣本操作流程：

1） 組織樣本必須保持鮮重，如果是凍存的組織，應(yīng)該室溫平行2小時以上，然后用生理鹽水沖洗干凈，再用濾紙把周圍的水分吸干，稱重！組織重量不能低于50mg；

2）組織勻漿液選取是PBS（PH=7.2-7.4，濃度為0.01mol/L）勻漿的比例為1:10，相當(dāng)于1g組織加9ml的勻漿液；

3）組織勻漿后，離心取上清，離心轉(zhuǎn)數(shù)為5000轉(zhuǎn)，但不能超過5000轉(zhuǎn)，時間為15分鐘；

4） 實驗中樣本提取的是200mg的樣本加1.8ml的勻漿液。

6、組織樣本操作中的常見問題：

1）問：從各樣品中取了同樣大小的肉塊吧？具體是取了多少？怎么取的？稱重方式嗎？之前好像提到過肉塊大小的尺寸，是不是用其他方式做到了各樣品的起始量的一致？

答：對于組織，不可能確定好每塊組織都達(dá)到恒定的重量，這個不太現(xiàn)實。都是按照固定的勻漿比例（勻漿比例為10%），相當(dāng)于1g組織加9ml的勻漿液，重量小的，勻漿液也會少。最終的濃度是不變的！

2）問：測定樣品時需要將樣品制成液體樣本吧？請問是如何做成液體樣品的？勻漿嗎？如果是勻漿方式的話應(yīng)該有溶劑的，使用了哪些溶劑呢？

答：勻漿比例在上面已經(jīng)告訴了，勻漿液采用的是0.01mol的PBS（磷酸鹽緩沖液）PH控制在7.2-7.4。

7、ELISA試劑盒操作細(xì)節(jié)常見問題整理：

1）問：是不是空白對照就是什么都不加？

答：不加樣本，不加樣本稀釋液，不加酶標(biāo)試劑，其他都可以加。

2）問：樣本稀釋液是配好的嗎？

答：樣本稀釋液是配好的。

3）問：樣本稀釋液可以用來直接稀釋血清嗎？

答：可以的，直接加40ul就可以了。

4）問：洗滌液是濃縮的；是一次配好，還是現(xiàn)配現(xiàn)用？謝謝。

答：濃縮的，現(xiàn)配現(xiàn)用。

5）問：加入的顯色液A\B分別是什么物質(zhì)？作用原理？

答：顯色劑A和B，是經(jīng)典的TMB顯色系統(tǒng)。具體原理可以參考免疫方面的教科書。在這里不詳細(xì)列出。

6）問：終止液是什么物質(zhì)？如何做到終止反應(yīng)的？

答：終止液是2mol的硫酸溶劑。終止反應(yīng)也是和原理相關(guān)。這個參考教科書！

7）問：稀釋液是什么成分？

答：標(biāo)準(zhǔn)稀釋液是PBS（PH=7.2-7.4，濃度是0.01mol/L）。樣本稀釋液是含有0.5%BSA的PBS（PH=7.2-7.4，濃度是0.01mol/L）。

8）問：需要避光保存的試劑是哪個？

答：需要避光的是顯色液B。

9）問：試劑盒從冰箱取出后，室溫放置會影響其效果嗎？

答：試劑盒在做實驗前應(yīng)該要室溫平衡一小時。短時間（3、4小時）沒有任何影響。

10）問：樣品研磨后是立即離心，還是在4度冰箱里提取幾個小時以后再離心？

答：樣本研磨后立即離心即可。

補(bǔ)充：5%BSA 封閉液(Blocking Buffer)適用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫組化實驗中非特異性蛋白結(jié)合位點的封閉。

8、樣本保存條件和時間怎么選擇？

9、最后如果樣本數(shù)據(jù)沒有達(dá)到預(yù)期效果，不要慌，可以按下面流程排查問題，或者聯(lián)系公司技術(shù)。