【貨號】?BI-WB005

【規(guī)格】?200T?/ 250T / 500T/ 2500T / 5000T /B （蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（5mg/mL））

【保存】10~30℃保存，12個月。蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液配制后需-20℃保存。

【產(chǎn)品組成】?

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【產(chǎn)品簡介】

BCA蛋白定量是最常用的蛋白濃度檢測方法，其與傳統(tǒng)方法相比，更簡單、更穩(wěn)定、更靈敏度。BCA法測定蛋白濃度受其他成分影響小，對于5%以內(nèi)的SDS、TritonX-100、Tween20、Tween80均具有很好的兼容性,但易受螯合劑、高濃度的還原劑等的影響。所以，在BCA法測定蛋白濃度前應(yīng)使蛋白溶液中的EDTA濃度≤10mM，DTT濃度≤1mM，2-ME≤0.01%。

BCA蛋白定量試劑盒在50~1000μg/mL濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，其最小檢出量為25μg/mL。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

【使用方法】

1、取1mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液完全加入到含有20mg的蛋白標(biāo)準(zhǔn)（BSA）中，充分溶解，后配制成20mg/mL的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。

2、取適量的5mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋至終濃度為500μg/mL或所需濃度。如取100μL 5mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入900μL稀釋液，充分混勻，即配制成500μg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3、根據(jù)樣品數(shù)量，按試劑（A）:試劑（B）=50:1的比例配制BCA工作液，即取50份BCA試劑A和1份BCA試劑B，充分混勻，即獲得BCA工作液。例如取5mLBCA試劑A和0.1mL BCA試劑B，配制成5.1mL BCA工作液，BCA工作液室溫24h內(nèi)穩(wěn)定。

4、將500μg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液按0、1、2、4、8、12、16、20μL加到96孔板或EP管中，加稀釋液補(bǔ)足至20μL，其蛋白標(biāo)準(zhǔn)濃度依次為0、25、50、100、200、300、400、500μg/mL。

5、加20μL待測蛋白到96孔板或EP管中，如果樣本不足20μL，用稀釋液補(bǔ)足至20μL。注意：如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測蛋白的溶液不同，應(yīng)在待測蛋白中加入20μL稀釋液；如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無需在待測蛋室溫白樣本孔中加入20μL稀釋液，以減少不同溶液的差異。

6、各孔或管加入200μL配制好的BCA工作液，37℃孵育20~30min。

7、酶標(biāo)儀或分光光度計測定562nm波長處吸光度（如無562nm，540~595nm之間的波長也可），各孔或管吸光度減去用未加500μg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以求得的差值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)孔或管中蛋白濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣品的蛋白濃度。

【注意事項】

1、如果檢測效果不佳，可以室溫放置2h或60℃放置30min，顏色會隨著時間的延長不斷加深。顯色反應(yīng)也會隨溫度升高而加快；如果濃度較低，可以適當(dāng)延長孵育時間或在較高溫度下孵育。

2、測定標(biāo)準(zhǔn)曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化，可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)。

3、BCA法檢測中樣本中不應(yīng)含有EDTA，否則影響檢測結(jié)果。

4、因BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，建議每次測定時都做標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5、如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通分光光度計測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大BCA工作液的用量使總體積不小于最小檢測體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大；使用分光光度計測定蛋白濃度時，可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。

6、為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)加熱，但是切勿過熱，否則易失效。

7、為保證蛋白的精確定量，樣品的提取和標(biāo)準(zhǔn)蛋白的配制最好選用相同的緩沖液，同時也要保證兩者檢測條件的一致性。如果緩沖液本身就有較高的背景值，建議使用其他的方法測定。

8、試劑（C）:蛋白標(biāo)準(zhǔn)（BSA）宜保存于10~30℃陰涼處，避免暴曬。

9、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

10、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。