【貨號】 BI-WB008

【規(guī)格】 100mL

【保存】 -20℃，12個(gè)月

【產(chǎn)品簡介】

RIPA裂解液(弱， 無抑制劑)是一種常用的細(xì)胞組織快速裂解液，主要成分為50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.25% 脫氧膽酸鈉，不含蛋白酶、磷酸酯酶等抑制劑。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP和ELISA等。

使用本裂解液時(shí)，用戶可以根據(jù)具體用途自行添加特定抑制劑。

【使用方法】

對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

1、融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當(dāng)?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/span>

2、對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50~100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μL裂解液即可，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加量到200μL或250μL。每100萬細(xì)胞用100μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2~4mg/ml，不同細(xì)胞有所不同。

對于組織樣品：

1、把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2、融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當(dāng)?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?/span>

3、按照每20mg組織加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

 4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5、充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg凍存的小鼠肝臟組織用200μL本裂解液裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為15~25mg/ml，不同狀態(tài)的不同組織有所不同。

6、如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

【注意事項(xiàng)】

1、如需添加蛋白酶抑制劑等，需自行準(zhǔn)備。

2、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

3、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。