BPR0011 |
牛凝血酶(>2000IU/mg) |
規(guī)格 | 1000U |
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【貨號】 BPR0011
【規(guī)格】 1000U
【保存】 2~8℃,3年。
【產(chǎn)品簡介】
凝血酶(Thrombin)來源于牛血漿,分子量37KD,是由兩條肽鏈(31KD和6KD)通過二硫鍵組成的。凝血酶是凝血酶原(凝血因子 Ⅱ)激活后形成的蛋白質(zhì)水解酶,其催化纖維蛋白原(fibrinogen)水解掉A肽和B肽,由此形成纖維蛋白單體,單體進(jìn)一步聚合,在血小板、紅細(xì)胞和白細(xì)胞等參與下形成血凝塊。由于凝血酶具有切割序列專一性強(qiáng),水解效率高的特點(diǎn),它被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā),其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂,尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。
【使用方法】
本凝血酶是一種廣泛用于切割標(biāo)簽的蛋白酶,能夠有效切質(zhì)量比僅為1:2000的蛋白。切割可在20℃到37℃之間切割0.3到16h。凝血酶最佳切割位點(diǎn)是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',這里X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸,一些經(jīng)常使用的識別位點(diǎn)是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他識別位點(diǎn)是 X2-R[K]-X1',這里X2 或者 X1'是甘氨酸,例如A-R-G和G-K-A,這里切割發(fā)生在第二個(gè)殘基后。在凝血酶切割位點(diǎn)和N末端標(biāo)簽之間插入五個(gè)甘氨酸殘基可改善切,通過這一"甘氨酸連接肽"只需較少酶量就可達(dá)到完全切割,而且也可以避免可能發(fā)生的錯(cuò)誤切割。有效的消化緩沖液是20mMTris-HCl緩沖液,含150mM氯化鈉,pH8.0。凝血酶可從切割產(chǎn)物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖親和純化,或者肝素瓊脂糖親和純化移去。